上周，给周老师跑了一次western blot，结果是：目的条带不清晰，出现杂带，样品中似乎有杂质导致条带背景很脏。

周老师把需要重跑的样品截图发我，道：“我是真的建议你先想想问题在哪再动手，一味地重复只不过是浪费时间、浪费样品。”

于是我跟她解释道：“可能是胶和膜的问题。胶是上周配的，用电泳液浸泡，一半被电泳液浸泡，一半没泡着。还有，膜可能途中干过，导致背景很脏。这几天帮鹃姐跑的样品避免了这两个问题，条带跑得还好。我再试试吧。”

“必须保证系统稳定可靠。这是胜任工作最最最基本的要求啦。”

起初她认为我未经思考，一味重复。我跟她说自己思考了原因，也在实践中得到了验证。她又开始说：要保持稳定。我不知该说啥。

我向她提议：要不要把上样量从15ul每孔改成10ul每孔。内参都连到一块了。

“你知不知道实验目的是什么？你知道你要关注的目的条带是哪个吗？”

我又苦笑一番，过去说“只要知道实验的一些参数就行了，问那么多干什么”的是你，如今说“你知不知道实验目的是什么”也是你，这样的老板，真的不值与共。

规避那两个因素后，跑出的条带，仍旧不堪入目。我把解决办法和可能原因列了出来：一，上样之前再次变性、离心；二，用纯水稀释的loading buffer提蛋白，可能没能使蛋白充分裂解，导致背景脏。

这一分析遭到了周老师强烈反驳：“你配过loading buffer吗？

“你知道RIPA和loading buffer里面的成分吗？”

我到网上比较了下，两者成分大致不差，只是RIPA里多了脱氧胆酸钠和NaCl，便回道：好像有些不同。